circ-0062270调控谷氨酰胺代谢影响黑色素瘤生长转移功能的机制研究

摘要:

目的 基于miR-136-5p/氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5（SLC1A5）通路轴探讨circ-0062270对黑色素瘤细胞凋亡及谷氨酸代谢的影响。方法 培养人表皮黑色素细胞（HEM）和黑色素瘤细胞SK-MEL-2、A2058和A375，采用qRT-PCR、Western blot法检测circ-0062270、miR-136-5p和SLC1A5表达。将筛选出的黑色素瘤细胞随机分为sh-NC组、sh-circ-0062270组、sh-circ-0062270+anti-miR-NC组和sh-circ-0062270+anti-miR-136-5p组，采用EdU法和MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，检测谷氨酸、α-酮戊二酸（α-KG）的产生及谷氨酰胺的消耗，Western blot法检测SLC1A5表达，并用双荧光素酶报告系统、RNA RIP实验验证circ-0062270与miR-136-5p、miR-136-5p与SLC1A5的靶向关系。结果 与HEM比较，黑色素瘤细胞中circ-0062270、SLC1A5表达升高，miR-136-5p表达降低（均P＜0.05）。circ-0062270与miR-136-5p、miR-136-5p与SLC1A5存在靶向结合作用。与sh-NC组比较，sh-circ-0062270组circ-0062270、EdU阳性细胞数、细胞存活率、谷氨酰胺消耗、α-KG和谷氨酸产生、SLC1A5表达降低，细胞凋亡率、miR-136-5p表达升高（均P＜0.05），但anti-miR-136-5p可部分逆转上述作用（均P＜0.05）。结论 circ-0062270在黑色素瘤组织中异常升高，可靶向调控miR-136-5p/SLC1A5轴调节谷氨酰胺代谢过程，从而影响黑色素瘤细胞的增殖与凋亡。

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