miR-144-3p靶向CaMKK2调控PI3K/PDK1/Akt信号通路抑制卵巢癌血管生成的机制

摘要:

目的 探讨miR-144-3p靶向钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2（CaMKK2）调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（PDK1）/蛋白激酶B（Akt）信号通路抑制卵巢癌血管生成的机制。方法 在人卵巢癌细胞OC3中，采用双荧光素酶法检测miR-144-3p与CaMKK2的靶向性。将OC3细胞分为NC组、miR-144-3p组、CaMKK2组和miR-144-3p+CaMKK2组，分别进行miR-144-3p、CaMKK2过表达载体及其阴性对照的共转染，另设置人正常卵巢上皮细胞IOSE80细胞作为对照组、未转染OC3细胞作为正常对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况，Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力，体外小管形成试验、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验检测血管生成情况，Western blot和RT-qPCR检测CaMKK2、PI3K、PDK1、Akt和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白和mRNA表达水平。结果 转染MKK2 3’UTR WT+miR-144-3p mimic的相对荧光素酶活性低于转染CaMKK2 3’UTR WT+miR-NC（P＜0.05）。与NC组比较，miR-144-3p组细胞活性、迁移细胞数、划痕愈合率、CAM实验新生血管数降低，小管形成抑制率升高（P＜0.05）；CaMKK2组细胞活性、迁移细胞数、划痕愈合率、CAM实验新生血管数升高，小管形成抑制率降低（P＜0.05）；且CaMKK2组细胞活性、迁移细胞数、划痕愈合率、CAM实验新生血管数高于miR-144-3p+CaMKK2组，小管形成抑制率低于miR-144-3p+CaMKK2组（P＜0.05）。与对照组比较，正常对照组、NC组、CaMKK2组PI3K、PDK1、Akt、VEGF相对蛋白表达量、mRNA相对升高（P＜0.05），miR-144-3p组降低（P＜0.05）；与正常对照组、NC组比较，miR-144-3p组PI3K、PDK1、Akt、VEGF相对蛋白表达量降低（P＜0.05），CaMKK2组升高（P＜0.05），且CaMKK2组高于其他各组（P＜0.05）。结论 miR-144-3p可靶向CaMKK2调控PI3K/PDK1/Akt信号通路抑制卵巢癌血管生成。

Abstract: