miR-143-5p靶向TIMP1对卵巢癌细胞及其移植瘤生长的抑制作用及其机制分析

摘要:

目的 探讨miR-143-5p靶向基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP1）对卵巢癌细胞及其移植瘤生长的抑制作用及作用机制。方法 构建 miR-143-5p mimics、miR-143-5p激动剂、siTIMP1、shTIMP1及阴性对照载体，双荧光素酶实验验证miR-143-5p对TIMP1的靶向关系。免疫印迹检测各组中性粒细胞中TIMP1、NETs相关蛋白[瓜氨酸化组蛋白（citH3）、淋巴细胞抗原6G（Ly6G）及组蛋白2A（Histone2A）]表达，荧光检测中性粒细胞TIMP1定位和NETs数量。获取上述各组培养基并分别与人卵巢癌细胞SKOV3共培养，检测SKOV3细胞活力、凋亡、侵袭和迁移能力。建立卵巢癌移植瘤小鼠模型，2周时瘤体体积测量、质量称重，4周时统计小鼠生存状态，观察瘤体病理改变、组织凋亡，ELISA、免疫荧光检测检测瘤体组织髓过氧化物酶（MPO）水平和citH3细胞数量。结果 细胞实验：与NC-miRNA组/si-Control组相比，miR-143-5p mimics组/siTIMP1组中性粒细胞的TIMP1、citH3、Ly6G、Histone2A蛋白表达均降低（均P＜0.05），TIMP1平均光密度、NETs数量均减少（均P＜0.05），SKOV3细胞活力、侵袭细胞数划痕愈合率均降低（均P＜0.05），SKOV3细胞凋亡率均升高（均P＜0.05）。体内移植瘤实验：与miRNA-NC组/sh-Control组相比，miR-143-5p 激动剂组/shTIMP1组瘤体体积、质量均降低，4周时小鼠生存率升高（均P＜0.05），移植瘤组织坏死区域增加、浸润性生长减少、细胞异型性减轻，肿瘤凋亡细胞数增加（均P＜0.05），瘤体组织TIMP1、citH3、Ly6G、Histone2A蛋白表达和MPO水平、citH3细胞数量均降低（均P＜0.05）。结论 miR-143-5p靶向抑制TIMP1介导的NETs形成抑制卵巢癌细胞恶性生物学行为、移植瘤生长。

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